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柱层层析硅胶粉分享操纵方式

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柱层层析硅胶粉分享操纵方式

宣布日期:2019-09-03 作者: 点击:


1.称量:200-300目硅胶,称30-70倍于上样量,若是极难分,也能够用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4摆布,以是要称40g硅胶,用烧杯量100ml也能够。


2.搅成匀浆:插手干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充实搅拌,若是洗脱剂是煤油醚/乙酸乙酯丙酮系统,就用煤油醚拌,若是洗脱剂是氯仿醇系统,就用氯仿拌,若是不能搅成匀浆,申明溶剂中含水量太大,特别是乙酸乙酯/丙酮,若是不与水配伍走分派色谱的话,必须事后用无水硫酸钠久置枯燥。氯仿用无水氯化钙枯燥,以撤除1%的醇。若是样品对酸敏感,不能用氯仿系统过柱。


3.装柱:将柱底用棉花塞紧,不用用海沙,插手约1/3 体积煤油醚(氯仿),装上蓄液球,翻开柱下活塞,将匀浆一次倾入蓄液球内,跟着沉降,会有一些硅胶沾在蓄液球内,用煤油醚(氯仿)将其突入柱中。


4.压实:沉降实现后,插手更多的煤油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定,柱床约被紧缩至9/10体积,不管走常压柱或加压柱,都应停止这一步,能够使分手度进步良多,且能够防止过柱时因为柱床萎缩发生开裂。


5.上样:干法湿法,海沙是没须要的。上样后,插手一些洗脱剂,再将一团脱脂棉塞至靠近硅胶外表,而后就能够安心地插手大批洗脱剂,而不会冲坏硅胶外表。压实:沉降实现后,插手更多的煤油醚,用双联球或气泵加压,直至流速恒定,柱床约被紧缩至9/10体积,不管走常压柱或加压柱,都应停止这一步,能够使分手度进步良多,且能够防止过柱时因为柱床萎缩发生开裂。


6.过柱和搜集:柱层析现实上是在分散和分手之间的衡量,太低的洗脱强度并不好,保举用梯度洗脱。搜集的例子:10mg.上样量,1g硅胶H,0.5ml收—馏分,1-2g上样量,50g硅胶(200-300目),20-50ml收—馏分。


7.检测:更多地操纵公用喷显剂,若是仅用紫外灯,会丧失较多产物,紫外的活络度-般比喷显剂底1-2个数目级。


8.送谱:搜集的产物旋干,在送谱前凡是须要重结晶。若是样品太少或为液体,可过一-小凝胶柱,作为送谱前的最初纯化手腕。可撤除氢谱1.5ppm摆布所谓的“硅胶"峰。


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